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\title{Abschlussbericht Projektpraktikum Nanobioelektronik\\
}
\author{Robert Morasch, Jerome Froissart, Timotheus Bachinger}
\date{23.07.13}
\logo{\includegraphics[scale=0.15]{pics/nano.jpg}}

 
\begin{document}

%titel
\begin{frame}
\maketitle 
\begin{center}
\footnotesize \textbf{Betreuer: Martin Schmid}
\end{center}
\end{frame}



 
\section{Arbeiten mit Zellkultur}

\subsection{Motivation}

\frame{
	\frametitle{Inhaltsverzeichnis}
	\tableofcontents[currentsection]
}

\begin{frame}
\frametitle{Motivation}
\begin{itemize}
\item Adherente Zellen müssen bei dichter Anwachsung umgesiedelt werden um die Vitalität zu erhalten
\item Aufgebrauchtes Nährlösung muss erneuert werden
\end{itemize}
\end{frame}

\subsection{Verfahren}

\begin{frame}
\frametitle{Verwendete Zelltypen}
\centering \textbf{HeLa Zelllinie}
\begin{itemize}
\item menschliche Epithelzellen eines Zervixkarzinoms (Gebärmutterhalskrebs)
\item entnommen aus Gebährmutterhalskrebs von der Patientin  Henrietta Lacks 1951
\item gut geeignet für Laborarbeiten
\end{itemize}
\end{frame}

\begin{frame}
\frametitle{Verfahren}
\begin{enumerate}
\item Petrischale mit Fibronectin (Zellkleber) befüllen
\pause  
\item Waschen der Zellkultur mit PBS (phosphate buffered saline) um tote Zellen auszuspülen
\pause
\item Hinzufügen von Trypsin um Zellverbund aufzutrennen
\pause
\item Lagern der Zellkultur für 2-10min im Inkubator 
\pause
\item Kontrollieren eines freien Zellverbands unter dem Mikroskop
\pause
\item Deaktivieren von Trypsin durch Zugabe von RPMI
\pause
\item Subkultivieren der aufgelösten Zellen
\pause
\item Lagern der Zellkulturen im Inkubator
\end{enumerate}
\end{frame}



\section{Zählen von DNA Brüchen - FOCI Methode}
\subsection{Bestrahlung von Zellen}

\frame{
	\frametitle{Inhaltsverzeichnis}
	\tableofcontents[currentsection]
}

\begin{frame}
\frametitle{Ionisierende Strahlung - Größen}
\begin{itemize}
\item \textbf{Energiedosis:} 1 Gray = $1 \frac{J}{kg}$
\pause
\item \textbf{Ionendosis:} $1 \frac{C}{kg}$
\pause
\item \textbf{Äquivalentdosis:} 1 Sievert = $1 \frac{J}{kg}$\\ mit Strahlungsgewichtfaktor gewichtet!\\
\pause
\vspace{0,3cm}
\centering $\rightarrow$ Gewichtsfaktor zwischen 1 (Gammastrahlung) und 20
\end{itemize}
\end{frame}


\begin{frame}
\frametitle{Auswirkung von Strahlung auf DNA}
\centering
DNA Schädigung durch Herausbrechen einzelner Mokleküle.
\vspace{0,3cm}
\pause
\begin{itemize}
\item \textbf{Direkte Schädigung:} hochenergetische Teilchen (z.B. $\alpha$ - Strahlung)
\pause
\item \textbf{Indirekte Schädigung:} freie Radikale durch ionisierte Wassermoleküle\\
\pause

Die Pokeabwehr wird verwendet zur Abwehr körperferner Bälle oberhalb der Brusthöhe, die nur mi
\vspace{0,3cm}
\centering $\rightarrow$ häufigere Schädigung durch Photonenbestrahlung
\end{itemize}
\end{frame}

\begin{frame}
\frametitle{DNA Reparaturmechanismus}
\begin{itemize}
\item \textbf{Nicht homologer Mechanismus:} \\
"Auffüllen" des zerstörten Basenpaars ohne Beachtung der richtigen Paarung: \textit{schnell, mäßig sicher}\\
Enzym: Poly(ADP-ribose)-Polymerase 1
\pause
\item \textbf{Homologer Mechanismus:} \\
"Kopieren" des unbeschädigten Stranges: \textit{langsam, sicher} 
\end{itemize}
\end{frame}


\subsection{FOCI - Verfahren}
\begin{frame}
\frametitle{FOCI -Verfahren}
\begin{itemize}
\item bei DNA Bruch: Phosphorylierung von H2AX an Serin: gH2AX
\pause
\item Bildung von gH2AX im Bereich um den DNA Bruch\\
\pause
\centering
\vspace{0,3cm}
$\rightarrow$ Sichtbarmachen mittels Immunfluoreszenzfärbung\\
\vspace{0,3cm}
\pause
$\rightarrow$ Abbildung mit Laser Scanning Microscope:\\
\vspace{0,2cm}

Mittels Fokusierung in verschiedenen Abständen lassen sich Zellen schichtweise abbilden\\
$\rightarrow$ Nach Bestrahlungsstopp: Einfärben mit Farbstoff nach 15min 
\end{itemize}
\end{frame}


\subsection{Ergebnisse}
\begin{frame}
\frametitle{}

\only<1>{
\begin{figure}
\includegraphics[scale=0.4]{pics/z-stack_200mGy619.jpg}
\caption{Zellen nach Bestrahlung mit 200mGr}
\end{figure}
}

\only<2>{
\begin{figure}
\includegraphics[scale=0.4]{pics/z-stack_200mGy620.jpg}
\caption{Zellen nach Bestrahlung mit 200mGr}
\end{figure}
}

\only<3>{
\begin{figure}
\includegraphics[scale=0.4]{pics/z-stack_200mGy621.jpg}
\caption{Zellen nach Bestrahlung mit 200mGr}
\end{figure}
}

\only<4>{
\begin{figure}
\includegraphics[scale=0.4]{pics/z-stack_200mGy622.jpg}
\caption{Zellen nach Bestrahlung mit 200mGr}
\end{figure}
}

\only<5>{
\begin{figure}
\includegraphics[scale=0.4]{pics/z-stack_200mGy623.jpg}
\caption{Zellen nach Bestrahlung mit 200mGr}
\end{figure}
}
\end{frame}

\begin{frame}
\frametitle{Auswertung}
\begin{figure}
\includegraphics[scale=0.4]{pics/FOCI2.png}
\end{figure}
\end{frame}

\begin{frame}
\frametitle{Auswertung - Probleme}
\begin{itemize}
\item Keine einheitliche Definition von FOCIs
\item Software verfügbar aber schwierige Parametereinstellung
\end{itemize}
\end{frame}




%%Quellen
%\begin{frame}
%\frametitle{Quellen}
%\begingroup
%\tiny
%\bibliography{praesi}
%\bibliographystyle{plain}
%\endgroup
%\end{frame}

\end{document}
